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技術(shù)文章
ATCC細(xì)胞培養(yǎng)中各種器皿滅菌注意事項(xiàng)
2017
4-251.ATCC細(xì)胞清洗玻璃制品時(shí)，浸酸之后一定要用自來(lái)水沖洗10—15次。因?yàn)闅埓娴南匆簩?duì)細(xì)胞粘附有很大影響。清洗塑料制品時(shí)要用棉花或柔軟紗布擦洗。千萬(wàn)不要用硬毛刷，否則損害塑料表面后細(xì)胞不易貼壁。Tip和Tube一定要用超聲清洗處理后逐個(gè)清洗。如沒(méi)有洗凈會(huì)影響下一次使用的效果。2.干熱滅菌時(shí)，應(yīng)在白天使用烤箱，并不斷觀察，以免發(fā)生意外。當(dāng)溫度超過(guò)100℃時(shí)，不能再打開(kāi)烤箱門(mén)。器皿烤完后，待溫度降至100℃之下才能開(kāi)烤箱門(mén)。金屬器械和橡膠、塑料制品不能使用干熱滅菌方法。.3.高...+ -
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分析細(xì)胞常見(jiàn)的消化液
2017
4-20ATCC細(xì)胞取材進(jìn)行原代培養(yǎng)時(shí)常常需要將組織塊消化解離形成細(xì)胞懸液，傳代培養(yǎng)時(shí)也需要將貼壁細(xì)胞從瓶壁上消化下來(lái)，常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和edta溶液，有時(shí)也用膠原酶(collagenase)溶液。1.胰酶溶液：胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示，常見(jiàn)有1：125和1：250，即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。組織培養(yǎng)用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%濃度，配制時(shí)要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡鹽溶液(如前面的D-Hank"s)，因?yàn)檫@些物質(zhì)會(huì)對(duì)...+ -
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結(jié)晶紫檢測(cè)法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)
2017
4-181．腫瘤細(xì)胞在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板各孔中加0.1ml含5×104～10×4WEHI-164細(xì)胞的培養(yǎng)液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液），37℃5％CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3小時(shí)，讓細(xì)胞帖壁。2．用RPMI-1640培養(yǎng)液10倍遞次稀釋TNF標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)需要3～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品或待檢樣品，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)孔。對(duì)照孔6個(gè)，3個(gè)陽(yáng)性對(duì)照孔各加0.1ml含4μgTNF的RPMI-1640培養(yǎng)液，3個(gè)陰性對(duì)照孔各加100μlRPMI...+ -
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質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作步驟
2017
4-131.1轉(zhuǎn)化細(xì)胞細(xì)胞鋪板：將細(xì)胞按70%的匯合度接種到96孔板。1.2轉(zhuǎn)染：16h后轉(zhuǎn)染螢光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒和RNA，每個(gè)樣品設(shè)置6個(gè)復(fù)孔(1)配制DNA和轉(zhuǎn)染試劑:96孔板轉(zhuǎn)染質(zhì)粒時(shí)每孔比例為pLenti：Firefly：Renilla：轉(zhuǎn)染試劑=0.2μg：0.1μg：0.01μg：0.25μL(2)稀釋好DNA及轉(zhuǎn)染試劑，常溫孵育5min(3)將稀釋好的DNA分別和轉(zhuǎn)染試劑混勻，常溫孵育20min(4)每孔棄去15μL培養(yǎng)基，將15μLDNA轉(zhuǎn)染混合液添加到每孔細(xì)胞樣品中...+ -
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小白鼠染色體的制備實(shí)驗(yàn)方法和步驟
2017
4-11(一)轉(zhuǎn)化細(xì)胞秋水仙素處理取骨髓前3～4小時(shí)先給小白鼠經(jīng)腹腔注入0.1％的秋水仙素，注射劑量為4毫克／每公斤動(dòng)物體重。(二)取骨髓經(jīng)秋水仙素處理的小白鼠，可用損傷脊髓法處死，然后用剪刀剪開(kāi)大腿上的皮膚和肌肉，取出大腿骨和脛骨，用一小塊紗布來(lái)回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關(guān)節(jié)頭，然后將股骨剪碎投入小燒杯中，用2毫升1％檸檬酸鈉溶液攪爛碎骨，使骨髓細(xì)胞游離出來(lái)。靜止片刻，用吸管把懸浮液吸到離心管中，可重復(fù)沖洗一次。此時(shí)離心管中的細(xì)胞懸浮液可達(dá)4～5毫升。(三)低滲...+ -
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細(xì)胞凋亡的變化分析
2017
4-6轉(zhuǎn)化細(xì)胞凋亡大多為生理性死亡，是細(xì)胞衰老過(guò)程中各個(gè)細(xì)胞功能逐漸減退的結(jié)果。凋亡可見(jiàn)于許多生理和病理過(guò)程中，如各種更替性組織衰亡更新，也可見(jiàn)于照射及應(yīng)用細(xì)胞抑制劑和數(shù)目性萎縮之時(shí)。腫瘤細(xì)胞也發(fā)生凋亡。這種壞死是活體內(nèi)單個(gè)細(xì)胞或小團(tuán)細(xì)胞的死亡，不是整個(gè)實(shí)質(zhì)區(qū)內(nèi)細(xì)胞同時(shí)死亡，死亡細(xì)胞的質(zhì)膜(細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜)不破裂，不引發(fā)死亡細(xì)胞的自溶也不引起急性炎癥反應(yīng)。凋亡的發(fā)生與基因調(diào)節(jié)有關(guān)。也有人稱(chēng)為程序性死亡(PCD)。轉(zhuǎn)化細(xì)胞凋亡對(duì)人體的生理平衡和疾病的發(fā)生具有重要意義。電鏡下凋亡的細(xì)...+ -
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ATCC細(xì)胞培養(yǎng)中使用血清的缺點(diǎn)
2017
4-1ATCC細(xì)胞培養(yǎng)中使用血清的缺點(diǎn)血清成分復(fù)雜，雖含許多對(duì)細(xì)胞有利成分，也含有對(duì)細(xì)胞有害的成分，使血清有幾個(gè)明顯的缺點(diǎn)：1.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞，在體內(nèi)狀態(tài)，血清不是它們接觸的生理學(xué)液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過(guò)程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)，血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(zhǎng)(成纖維細(xì)胞)同時(shí)抑制另一類(lèi)細(xì)胞生長(zhǎng)(表皮細(xì)胞)。2.血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗...+ -
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新生大鼠頸上交感神經(jīng)元分散細(xì)胞培養(yǎng)
2017
3-30干細(xì)胞交感神經(jīng)系統(tǒng)在維持機(jī)體的正常功能和對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性反應(yīng)中起著十分重要的作用。交感神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)特別有助于神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育和可塑性研究，利用體外培養(yǎng)系統(tǒng)可進(jìn)行交感神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)生、死亡、形態(tài)和生化發(fā)育、遞質(zhì)表形的獲得，以及靶組織與傳入纖維的突觸形成的研究。此外，通過(guò)體外培養(yǎng)系統(tǒng)可獲得關(guān)于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、激素，細(xì)胞因子等調(diào)節(jié)交感神經(jīng)元發(fā)育的信息，了解傳入纖維的輸入以及與靶組織的的機(jī)制。1、材料和方法實(shí)驗(yàn)用出生當(dāng)天的昆明種大鼠，在無(wú)菌條件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖鑷在解剖顯微...+ -
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CO2培養(yǎng)箱如何消毒
2017
3-28干細(xì)胞CO2培養(yǎng)箱如果是隔水式培養(yǎng)箱可以采用甲酸熏蒸(甲醛與高錳酸鉀反應(yīng)生成甲酸)，然后再用75%酒精擦培養(yǎng)箱內(nèi)壁即可，效果比較好。如果是氣套式的培養(yǎng)箱用75%酒精直接擦培養(yǎng)箱內(nèi)壁即可，或采用隔水式熏蒸，但熏蒸前要先將二氧化碳和溫度探頭封閉好，防止甲酸腐蝕。干細(xì)胞CO2培養(yǎng)箱是實(shí)驗(yàn)室*的儀器，但因其中需放置盛水容器而濕度較高，從而導(dǎo)致霉斑(經(jīng)培養(yǎng)鑒定為絲狀真菌)快速生長(zhǎng)而影響工作，有礙觀瞻和可能導(dǎo)致試驗(yàn)樣本污染或院內(nèi)感染擴(kuò)散。雖使用了硫酸銅溶液、75%乙醇溶液或紫外線照射等多...+ -
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冷凍細(xì)胞活化操作
2017
3-231、ATCC細(xì)胞冷凍細(xì)胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成傷害，導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。2、細(xì)胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細(xì)胞生長(zhǎng)或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。3、材料37℃恒溫水槽、新鮮培養(yǎng)基、無(wú)菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶、液氮或干冰容器4、ATCC細(xì)胞步驟：(1)操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。(2)自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過(guò)程，此時(shí)蓋子易松掉。(3)將新鮮培養(yǎng)基置于37...+ -
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冷凍ATCC細(xì)胞活化技術(shù)分析
2017
3-21冷凍ATCC細(xì)胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對(duì)細(xì)胞造成傷害，導(dǎo)致細(xì)胞之死亡。細(xì)胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細(xì)胞生長(zhǎng)或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。材料37℃恒溫水，新鮮培養(yǎng)基，無(wú)菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶，液氮或干冰容器步驟：操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過(guò)程，此時(shí)蓋子易松掉。將新鮮培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無(wú)...+ -
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骨髓瘤細(xì)胞懸液的制備方法分析
2017
3-16zui常用的干細(xì)胞系為SP2/0和NS-1，均來(lái)自BALB/c小鼠骨髓瘤。一般在準(zhǔn)備融合前的兩周就應(yīng)開(kāi)始復(fù)蘇骨髓瘤細(xì)胞，為確保該細(xì)胞對(duì)HAT的敏感性，每3～6個(gè)月應(yīng)用8-氮雜鳥(niǎo)嘌呤篩選一次，以防止細(xì)胞的突變。骨髓瘤細(xì)胞懸液的制備方法如下：1．將剛復(fù)蘇的瘤細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，5%C02,37℃溫箱孵育。每2～3天換液一次，3～5天傳代一次，待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后方可供細(xì)胞融合用。于融合前48～36小時(shí)，將骨髓細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)（一般按一塊96孔板的融合試驗(yàn)...+
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