1．腫瘤細胞在96孔細胞培養板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164細胞的培養液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培養箱中培養2～3小時，讓細胞帖壁。

2．用RPMI-1640培養液10倍遞次稀釋TNF標準品，根據需要3～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標準品或待檢樣品，每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個，3個陽性對照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培養液，3個陰性對照孔各加100μl RPMI-1640培養液。繼續培養18～24小時。

3．甩去培養液，用PBS小心洗滌一次，每孔加0.1ml 10％甲醇溶液固定腫瘤細胞30秒鐘。

4．吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml結晶紫染液，室溫中放置20分鐘。

5．輕輕甩去染色液，用蒸餾水洗滌各孔，將培養板倒置于吸水紙上吸干水分。自然干燥或37℃烘干。此板可以在室溫中長期保存。

6．測定前，每孔加0.1ml 33％醋酸脫色，充分振蕩后在570nm處測定光吸收度。用光吸收度（OD）值對樣品稀釋度作圖，比較標準品曲線和待檢樣品曲線即可得到待測樣品中的腫瘤細胞因子活性。