產品屬性：

英文名稱：Eukaryotic Hyaluronan Synthase 1 (HAS1)

HuHAS1; HA synthase 1; Hyaluronate synthase 1; Hyaluronic acid synthase 1

型號：GOY-01D3027

酶與激酶

物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

來源：真核表達

宿主S. cerevisiae

內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：n/a

預測分子量：67.8kDa

實際分子量：-(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽：Met1~Val583 (Accession # Q8CH93) with N-terminal His Tag

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有0.01%SKL, 1mM DTT, 5%Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點：-

應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg

蛋白表達及純化：

1.培養500ml哺乳動物細胞，然后將重組質粒轉染到細胞中，通過瞬時表達產生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

交付內容：純化好的目標蛋白及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽（Tag）或切除純化標簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達90%以上。

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操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1、在每1mL冷Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑，1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。

2、每100mg固體組織置于培養皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1mL冷Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3、取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉/分，4℃離心5min；

4、取上清轉移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5、分裝保存于-70℃，避免反復凍融。

Ⅱ 培養細胞蛋白提取

1、貼壁培養的細胞，吸去培養基后，加入10mL/150mm培養板的冷PBS洗兩次，每次振搖數次以盡量去除培養液；

2、懸浮培養的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養液移至離心管中，1000轉/分離心10min，再用10mL/150mm培養板的冷PBS，1000轉/分離心5min洗兩次；

3、在每1mL冷Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑，1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。

4、細胞洗滌后，轉至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5、置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6、14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7、分裝保存于-70℃，避免反復凍融。

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