蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告。可按客戶要求提供含純化標(biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant High Temperature Requirement Factor A1 (HTRA1)

HtrA; L56; ORF480; PRSS11; HtrA Serine Peptidase 1; Protease,Serine,11; IGFBP5-Protease; High-temperature requirement A serine peptidase 1

型號(hào)：GOY-01D2053

酶與激酶

物種：Escherichia coli(大腸桿菌)

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位：：分泌

預(yù)測(cè)分子量：15.4kDa

實(shí)際分子量：16kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書)

片段與標(biāo)簽：Ala10~Gly146 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：100mM NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液（pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點(diǎn)：5.7

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

基質(zhì)金屬9(MMP9)重組蛋白英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 9 (MMP9)GELB; Gelatinase B; CLG4B; CLG4-B; 92 KDa Gelatinase; 92kDa Type IV Collagenase物種：Horse，馬

基質(zhì)金屬3(MMP3)真核蛋白英文名稱：Eukaryotic Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3)SL1; STMY; STMY1; STR1; Progelatinase; Stromelysin 1; Transin-1物種：Human，人

蛋白激酶Cζ(PKCz)重組蛋白英文名稱：Recombinant Protein Kinase C Zeta (PKCz)PKC2; PKC-Z; PRKCZ; Protein Kinase M Zeta物種：Rat，大鼠

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人腺細(xì)胞英文名稱：MCF-7

醋林 質(zhì)量規(guī)格：純度大于98% Triptorelin Acetate

 大鼠胰島素細(xì)胞英文名稱：INS-1

鹽萬(wàn)古 質(zhì)量規(guī)格：≥900μg/mg,USP33,BR Vancomycin HCl

 牛奶蛋白胨/蛋白胨C/Peptonized milkBR100/500克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

凡德他尼 質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于細(xì)胞培養(yǎng) Vandetanib

 伊紅美蘭平板/EMB Agar Plate10塊國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

鹽萬(wàn)古(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 Vancomycin HCl

 /孢他啶/孢他定/孢噻甲羧肟/孢塔齊定/噻甲肟孢菌素//Ceftazidime添加于100mlHB41553毫克/支×5國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

酒石伐倫克林 質(zhì)量規(guī)格：>98% Varenicline Tartrate

 LIM培養(yǎng)基/賴氨吲哚動(dòng)力培養(yǎng)基/賴氨靛基質(zhì)動(dòng)力培養(yǎng)基/LIM Medium用于鏈球菌的分離培養(yǎng)；細(xì)菌的賴氨、吲哚和動(dòng)力復(fù)合生化試驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

酒石伐倫克林(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Varenicline Tartrate

 人胃粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

酒石長(zhǎng)春瑞賓/重酒石長(zhǎng)春瑞賓 質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP,BR Vinorelbine Tartrate

 大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

重酒石長(zhǎng)春瑞賓(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Vinorelbine Tartrate

高溫需求因子A1(HTRA1)重組蛋白(大腸桿菌大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

2 ug pOPI3CAT pOPI3CAT 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

馬黃體生成素(LH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

2 ug pCMV-Flag-N pCMV-Flag-N 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

大鼠鈣網(wǎng)蛋白(CRT)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）  250ml*20瓶

豬白介素6(IL-6)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

2 ug pNEBRX1-hygro pNEBRX1-hygro 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH6.8   Tris-HCl Buffer,1.0M,pH6.8   常溫保存

大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGF-β2)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

肉湯培養(yǎng)基D Broth medium D (Lactose monohydrate broth) 250g