冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃30~60分鐘→ （-20℃30分鐘） → -80℃16~18小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品屬性：

組織來源：肺動脈組織

產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

細胞簡介：

分離自肺大動脈組織；肺大動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈。肺大動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經肺門入肺。肺動脈干位于心包內，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進入右肺上、中、下葉，是肺血管的重要結構細胞之一，在調控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長特點。異常是肺動脈高壓發生發展的重要病理學特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關鍵。研究表明，急性和慢性缺氧均可導致肺動脈高壓，即缺氧性肺動脈高壓，推斷缺氧可能是通過促進肺大動脈平滑肌細胞的增殖而參與缺氧性肺動脈高壓的發生發展。主要功能：

①細胞表面表達介質（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應；

②是多數重要動脈疾病的靶細胞。

主要病生理變化：

①平滑肌增生易致肺動脈高壓；

②先天性肺動脈狹窄；

③肺動脈栓塞。

方法簡介：

采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10cells/瓶。

質量檢測：

經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態優良

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

培養操作：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入 10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4.將細胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為類。

1.細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗一遍后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2.4min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

富含半C端蛋白1抗體

E1A激活基因刺激蛋白2抗體

細胞壁合成蛋白43抗體

19號染色體開放閱讀框29抗體

Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體
大鼠大內皮素(Big ET)elisa檢測試劑盒

大鼠催乳素(PRL)elisa檢測試劑盒

大鼠催產素(OT)elisa檢測試劑盒

大鼠促胰液素/胰泌素(Sct)elisa檢測試劑盒

補體蛋白4(C4)elisa分析檢測試劑盒

槲皮素含量測定試劑盒

槲皮素含量檢測

琥珀酸含量測試盒