大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞；BOS-5說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞；BOS-5說明書
形態特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞系來源于一雌性大額牛與婆羅門牛雜交F1代的耳部皮膚組織，2010年由中科院昆明細胞庫建立。 
培養條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件  基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權限 B類

細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。

F9(小鼠畸胎瘤細胞)    5×106cells/瓶×2            
GoldCassette-TRX/TRX重組標簽蛋白快速檢測試劑盒(精裝)    2次        2次、10次    
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BRL(大鼠肝細胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠肺細胞    英文名稱：        Lewis    
Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)    規格：        100次    
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Korser氏肉湯發酵管    BR    國產/進口    20支    
人腦血管平滑肌細胞                
標準平板計數瓊脂培養基/SPCA    用于細菌總數的計數    國產/進口    250克    
人成纖維瘤細胞    英文名稱：        HT1080    
聚山梨酯80培養基(需氧、厭氧菌)/Tween80 Medium(Bacteria)    油劑藥品的無菌試驗    國產/進口    250克    
大鼠胃粘膜上細胞*培養基    100mL            
青霉素敏感紙片    炭疽桿菌檢測用配套試劑    國產/進口    20片    
Y1(Y-1) (小鼠腎上腺質細胞)    5×106cells/瓶×2            
耶爾森氏菌顯色培養基        國產/進口    250克    
SF-295(人XG惡性膠質瘤細胞)    5×106cells/瓶×2            
MS751(人子宮頸表細胞)    5×106cells/瓶×2  
DNA  Tween 20    131024-100    100mL
250mg    噻唑蘭    
50 次    DNA 電泳分子量標準 (3)φX174 DNA/Hinc Ⅱ    
50 次    柱式糞便 DNAout    
1mL    XL1-Blue 種    
Klenow 片段 (3´ → 5´ exo-)    131235-200    200U
柱式 OLIGO 回收試劑盒    80401-50    50 次
1g    羧芐青    
30 次    單細胞全基因組擴增試劑盒    
30 次    一站式蛋白質非變性 PAGE 套裝 ( 中 pH)    
1000μL    組蛋白 3.1 小鼠單抗    
核酸外切酶 T    130627-250    250U
海藻糖溶液，1.5M，PCR     130506-1.5    1.5mL
30mL    天凈沙核酸濃縮劑    
1mL    EGY48 酵母種    
100mL    一管式 TMB 顯色液 A( 可溶型 )     
24 次    凋亡 DNAout    
N- 乙酰 -L- 半胱氨酸    CAS616-91-1    5g
兩棲類和爬行類動物種屬鑒定 PCR Mix    131128I-100    100 次
2000U    XhoI