大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞；BOS-6說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細胞；BOS-6說明書
形態特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞系來源于一雌性大額牛與婆羅門牛雜交F1代的耳部皮膚組織，2010年由中科院昆明細胞庫建立。 
培養條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件  基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權限 B類

細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。

大鼠角膜內細胞*培養基    100mL            
小鼠骨肉瘤    英文名稱：        LM-8    
人膀胱細胞    英文名稱：        5637    
人胰腺氟尿嘧啶耐藥    英文名稱：        PATU-8988/FU    
ER培養基/Eriksson Medium    BR    國產/進口    10升    
人破骨細胞*培養基    100mL            
WORT瓊脂/WORT Agar    用于真菌,特別是酵母菌的計數和增菌培養    國產/進口    250克    
人肺紫杉醇耐藥株    英文名稱：        A549/ Taxol    
堿性L-G培養基基礎/Alkaline L-G medium Base    酸性物質處理的結核桿菌標本    國產/進口    250克    
大鼠真成纖維細胞*培養基    100mL            
葡萄糖銨發酵管    BR    國產/進口    20支    
大鼠腸靜脈內細胞*培養基    100mL            
選擇性巧克力平板/Selectivity chocolate Plate        國產/進口    10塊    
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢腺細胞系                
NCI-H2170(人肺鱗細胞)    5×106cells/瓶×2            
Nuclei蛋白抽提試劑盒（帶酶抑制劑）    50次    gersion    國產    
EA.hy926(人臍靜脈細胞融合細胞)    5×106cells/瓶×2 多聚半乳糖醛    CAS9049-37-0    1g
蛋白磷酸酶抑制劑混合液 2    130525-1    1mL
250 次    柱式動物 RNAout    
50g    酪蛋白    
20Ku    脲酶 ( 尿素酶 巨豆 )    
50 mL    親和層析柱    
三氯    CAS76-03-9    100g
pNPP 干粉    131116-1    1g
30μL    β-Actin 小鼠單抗    
500mL    MEM 培養基 ( 含 1% 雙抗 +10% 小牛血清 )    
5g    1- 萘胺    
20 T    乙酰膽堿轉移酶測試盒    
50 次    玻璃珠法柱式真 DNAout    
Karnovsky 固定液    131226-250    250 mL
一站式磁珠法植物 mRNAout    130973-50    50 次
2mL    鎳柱介質    
20μL    Ac-DEVD-FMK(Caspase3Inhibitor)    
1mg    Indo-1 AM    
30 次    單孢子全基因組擴增試劑盒    
JC-10    22-0420-5    5mg