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產品型號：5ml
更新時間：2025-10-31
廠商性質：經銷商
訪問量：641
服務熱線021-39596320
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產品詳細介紹：
快速實時熒光定量PCR預混體系是專用于染料法(SYBR GreenⅠ)實時熒光定量PCR的預混體系，濃度為2×，包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I熒光染料和Mg2+，操作簡單方便。主要用于基因組DNA靶序列和RNA反轉錄后的cDNA靶序列檢測。本品所含熒光染料SYBR Green I可以與所有的雙鏈DNA相結合，使該產品可用于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標記探針。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效減少在常溫條件下由引物和模板非特異性結合或引物二聚體而產生的非特異性擴增，酶的激活僅需在95℃孵育20s。整個PCR反應過程比普通反應可節省約40分鐘，大大縮短了PCR的反應時間。PCR緩沖體系與熱啟動酶的組合，有效抑制了非特異產物的產生，并顯著提高PCR的擴增效率。該產品應用范圍廣，適用于普通和快速定量PCR程序，可適用于無需ROX校正的所有熒光定量PCR儀。 ROX染料用于校正定量PCR儀孔與孔之間產生的熒光信號誤差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 擴增儀。不同儀器的激發光學系統有所不同，因此ROX染料的濃度必須與相應的熒光定量PCR儀相匹配。 注意事項： 1、使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，并經短暫離心后使用。 2、本產品中含有熒光染料SYBR Green I，保存本產品或配制PCR反應液時應避免強光照射。 3、避免反復凍融本品，反復凍融可能使產品性能下降。本產品長期保存可置于-20℃，避光。如果在短期內需要頻繁使用，可在2～8℃保存。 4、本品不能用于探針法熒光定量PCR。 儲存條件：-20℃，避免反復凍融。 |
下列是產品的訂購信息!
產品僅用于科研。
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 貨號 |
快速實時熒光定量PCR預混體系 | BaFaSYBR Mixture | 5ml | GOY-F10298 |
DNA提取流程圖：
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱，離心管中加入ME(巰基乙)，(10mL加80ul，50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了)，在液氮中迅速磨成精細粉末，裝入50mL離心管，按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液，顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10min，期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)，異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清，等體積的，異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液，4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm，4℃離心20min
(8)棄上清，用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚異戊(25:24:1)抽提兩次，異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙，在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm，4℃離心20min
(12)棄上清，沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
操作步驟：
1. 勻漿處理：
a.組織將組織在液氮中磨碎，每50-100mg組織加入1ml TRIzol，用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物分離。
3.可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
5. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
6. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
7. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。
