冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品屬性：

名稱    大鼠皮層神經元細胞
2.組織來源：腦組織

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠皮層神經元細胞分離自腦皮層組織；皮層神經元細胞是構成中樞神經系統(tǒng)結構和功能的基本單位。神經元是具有長突觸(軸突)的細胞，它由細胞體和細胞突起構成。在長的軸突上套有一層鞘，組成神經纖維，它的末端的細小分支叫做神經末梢。細胞體位于腦、脊髓和神經節(jié)中，細胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細胞體是細胞含核的部分，其形狀大小有很大差別，直徑約4-120微米。核大而圓，位于細胞中央，染色質少，核仁明顯。細胞質內有斑塊狀的核外染色質，還有許多神經元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分，又可分為樹突和軸突。每個神經元可以有一或多個樹突，可以接受刺激并將興奮傳入細胞體。每個神經元只有一個軸突，可以把興奮從胞體傳送到另一個神經元或其他組織，如肌肉或腺體。皮質神經元是大腦皮質的主要組成細胞之一，是大腦進行功能活動調節(jié)的基本單位，參與動物多種中樞神經系統(tǒng)疾病的病理過程。通過形態(tài)學觀察顯示神經元從貼壁、伸出突起開始；突起逐漸增多，而后突起進一步增多并逐漸成網，同時細胞胞體增大，周邊光暈明顯。10-12d細胞為豐滿，隨后神經元開始裂解，突起逐漸減少，細胞已退化變性，輪廓模糊，光暈消失，細胞變形。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠皮層神經元細胞采用消化法、神經元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠皮層神經元細胞經β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經元細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
硫酸葡聚糖1g  即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒300 次

聚乙二醇100g  即用型熒光定量 PCR 試劑盒600 次

酪蛋白50g  即用型熒光定量 PCR 試劑盒100 次

脫脂奶粉 ( 雜交專用 )50g  即用型易錯 PCR 試劑盒100 次

即用型封堵液 (NC 專用 ) 50mL  即用型熱啟動 PCR 試劑盒1.5mL
大鼠髓過氧化物酶(MPO)elisa檢測試劑盒

大鼠酸性磷酸酶(ACP)elisa檢測試劑盒

大鼠酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)elisa檢測試劑盒

大鼠酸性成纖維細胞生長因子(aFGF/FGF-1)elisa檢測試劑盒

大鼠酸性β葡萄糖苷酶(GBA)elisa檢測試劑盒
大鼠皮層神經元細胞人白介素8(IL-8/CXCL8)elisa分析檢測試劑盒

人白介素8(IL-8/CXCL8)elisa檢測試劑盒

人白介素8(IL-8/CXCL8)自身抗體elisa分析檢測試劑盒

人白介素8(IL-8/CXCL8)自身抗體elisa檢測試劑盒

人白介素增強子結合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)elisa分析檢測試劑盒
實驗報告：
產品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。