冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品屬性：

名稱    SW480 [SW-480] (結腸癌細胞) (STR鑒定正確)
別稱 SW-480; SW 480; SW480E

種屬 人類

年齡（性別） 男性，50歲

組織來源 直腸；結直腸腺癌

生長特性 貼壁細胞

細胞形態 上皮細胞樣

背景描述 SW480 [SW-480]細胞源自原位直腸腺癌，和SW620細胞源自同一病人一年后的淋巴結轉移。CSAp和直腸抗體3陰性；角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。p53基因第273位密碼子的G→A突變引起Arg→His替代，309位密碼子的C→T突變導致Pro→Ser替代。細胞p53蛋白表達水平提高，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達呈陽性，癌基因N-myc的表達未做檢測。SW480 [SW-480]細胞不表達細胞溶解酶，一種與腫瘤入侵相關的金屬蛋白酶。有報道稱，SW480 [SW-480]細胞表達GM-CSF。SW480 [SW-480]細胞ras原癌基因的12位密碼子有一個突變，可以用作PCR法檢測該突變的陽性對照。1978年11月，A·Leibovitz將其提交給ATCC時已傳代至第91代。

生物安全等級 1

生長培養基 Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時間 ~30-50小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，100%

溫度：37℃

致瘤性 Yes. Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells.

受體表達情況 epidermal growth factor (EGF)

基因表達情況 carcinoembryonic antigen (CEA) 0.7 ng/10^6 cells/10 days; keratin; transforming growth factor beta, myc+; myb+ ; ras+; fos+; sis+; p53+; abl -; ros -; src -, HLA A2, B8, B17; Blood Type A; Rh+, The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining., The line is positive for expression of c-myc, K-ras, H-ras, N-ras, myb, sis and fos oncogenes.

注意事項 1、該細胞推薦使用Leibovitz's L-15培養基進行培養，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，會產生細胞毒性； 2、該細胞不建議更換為DMEM培養，圓形較多，效果不好。

保藏機構 ATCC; CCL-228 DSMZ; ACC-313 ECACC; 87092801

培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
CFDA SE ( 細胞增殖示蹤熒光探針 )5mg  DNA 電泳分子量標準 (3)φX174 DNA/Hae Ⅲ50 次

Congo Red 100mg  DNA 電泳分子量標準 (3)λDNA/HindIII50 次

Cyanine 3-NHS Ester12x50nm  DNA 電泳分子量標準 (3)λDNA/EcoR I50 次

Cyanine 5-NHS Ester12x50nm  DNA 電泳分子量標準 (3)λDNA/BstE II50 次

DAF-FM DA(NO 熒光探針 )100 次
大鼠toll樣受體1(TLR1)elisa檢測試劑盒

大鼠TGF-β誘導早期基因1(TIEG1)elisa檢測試劑盒

大鼠Tau蛋白elisa檢測試劑盒免費代測

大鼠TAR DNA結合蛋白43(TARDBP)elisa檢測試劑盒

大鼠Syndecan-1/CD138(SDC1)elisa檢測試劑盒
SW480 [SW-480] (結腸癌細胞)大鼠E1A結合蛋白P300(EP300)elisa檢測試劑盒

大鼠E3-RSIκB elisa分析檢測試劑盒

大鼠E3-RSIκB elisa檢測試劑盒

大鼠elisa分析檢測試劑盒

大鼠elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產品僅用于科研一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。