培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產(chǎn)品屬性：

名稱    P3X63Ag8.653 (小鼠骨髓瘤細(xì)胞)(STR鑒定正確)
別稱 P3-X63-Ag8.653; P3-X63-Ag8-653; P3-x63-Ag8 653; P3-X63-Ag 8.653; P3-X63Ag8.653; P3-X63.Ag8.653; P3/X63/Ag8.653; P3X63 Ag8.653; P3X63 AG8-653; P3X63-Ag8.653; P3x63-Ag8.653; P3X63 AG 8.653; P3X63Ag8653; P3-X63-Ag8-6-5-3; P3X63Ag8-6-5-3; P3.times.63 Ag8.653; P3.653; X63-Ag8-653; X63-Ag8.653; X63.Ag8.653; X63Ag8-653; X63Ag8.653; X63AG8.653; X63-Ag 8.6.5.3; GM03570; GM3570; NS653

種屬 小鼠

年齡（性別） 不詳

組織來源 B淋巴細(xì)胞；漿細(xì)胞；骨髓瘤

生長(zhǎng)特性 懸浮細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 淋巴母細(xì)胞樣

背景描述 P3X63Ag8.653細(xì)胞能抗8-氮雜鳥嘌呤，但對(duì)HAT敏感，可以用作雜交瘤時(shí)的融合配體。P3X63Ag8.653細(xì)胞能生成，但不分泌免疫球蛋白。據(jù)報(bào)道，P3X63Ag8.653細(xì)胞是缺失了3-酮類固醇還原酶活性的營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞。

生物安全等級(jí) 1

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時(shí)間 ~30-60小時(shí)

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

抗原表達(dá)情況 H-2d

注意事項(xiàng) 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液；請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-1580 ATCC; CRL-8008 DSMZ; ACC-43 ECACC; 85011420

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大提柱式植物 RNAout5次  柱式細(xì)菌 RNAout50 次

柱式植物 RNA-DNA 雙提試劑盒50 次  柱式細(xì)菌 RNA-DNA 雙提試劑盒50 次

柱式藻類 RNAout50 次  柱式細(xì)菌 DNAout50 次

大提柱式藻類 RNAout5次  柱式細(xì)菌 DNAout( 含 )50 次

土壤 RNAout50 次  柱式無內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNAout50 次
大鼠Dickkopf相關(guān)蛋白1(DKK1)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠C組著色性干皮病偶聯(lián)因子(XPC)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠C-型鈉尿肽(CNP)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠C-肽(C-Peptide)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠CD83分子(CD83)elisa檢測(cè)試劑盒
P3X63Ag8.653 (小鼠骨髓瘤細(xì)胞)大鼠心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠心肌特異性肌鈣蛋白T(c)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠心肌營(yíng)養(yǎng)素1(CT1)elisa檢測(cè)試劑盒

大鼠心肌營(yíng)養(yǎng)素1(CT-1)elisa檢測(cè)試劑盒

冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。