冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品屬性：

名稱    BALB/3T3 clone A31 (小鼠胚胎成纖維細胞) (種屬鑒定正確)
別稱 BALB/c 3T3 clone A31; Balb/c3T3; Balb/c 3T3; BALB/3T3; Balb/3T3-4-Cl31; 3T3 clone A31; BALB/3T3 cl. A31; BALB 3T3 clone A31; BALB/3T3 (clone A31); B/C3T3; 3T3-A31; 3T3(A31)

種屬 小鼠

年齡（性別） 胚胎，懷孕14-17天

組織來源 胚胎；成纖維細胞

生長特性 貼壁細胞

細胞形態 成纖維細胞樣

背景描述 BALB/3T3 clone A31細胞是由S·A·Aaronson和G·T·Todaro于1968年從裂解的14-17天的BALB/c小鼠胚胎中建立的幾株細胞之一。BALB/3T3 clone A31細胞對接觸抑制特別敏感，生長需高倍數稀釋，飽和濃度低。此外，BALB/3T3 clone A31細胞對癌基因DNA病毒SV40和小鼠肉瘤病毒高度易感。

生物安全等級 1

生長培養基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:2-1:3

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

保藏機構 ATCC; CCL-163 ECACC; 86110401

培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
24羥化酶抗體

細胞角蛋白3+12抗體

P450 17抗體

P450 7A1抗體/7a羥化酶

酶9抗體
大鼠L1-細胞粘附分子(L1CAM)elisa檢測試劑盒

大鼠Kruppel樣因子4(KLF4)elisa檢測試劑盒

大鼠Kruppel樣因子2(KLF2)elisa檢測試劑盒

大鼠Klotho蛋白(KL)elisa檢測試劑盒

大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)elisa檢測試劑盒
BALB/3T3 clone A31 (小鼠胚胎成纖維細胞)大鼠血管內皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)elisa檢測試劑盒

大鼠血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2)elisa檢測試劑盒

大鼠血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2)elisa檢測試劑盒免費代測

大鼠血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)elisa檢測試劑盒

大鼠血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1)elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產品僅用于科研一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。