冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產品屬性：

名稱    大鼠髖臼軟骨細胞
2.組織來源：軟骨組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

大鼠髖臼軟骨細胞分離自髖關節軟骨組織，髖關節是人體大、穩定的關節之一，是典型的球臼關節。髖關節既具有良好的內在穩定性，也具有靈活的活動性。髖臼位于髖骨外側面中央，呈半球形深凹，直徑約30~50mm，表面覆蓋厚約2mm的透明關節軟骨，呈半月形分布。中央是髖臼窩，無軟骨覆蓋，由哈佛腺充填，可以隨關節內壓力的增減擠出或者吸入關節液，以維持關節內壓力的平衡。髖臼邊緣的環形關節盂唇可以加深、加寬髖臼，使髖臼容納股骨頭的大部并處于穩定的位置，加強了髖關節的穩定性。幼稚的關節軟骨細胞位于關節軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關節軟骨表面平行，越向深層的關節軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質弱嗜堿性，常見數量不一的脂滴。成熟的關節軟骨細胞多2-8個成群分布于關節軟骨陷窩內，這些關節軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，關節軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，關節軟骨細胞收縮為不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體外培養的關節軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠髖臼軟骨細胞采用膠原酶聯合中性消化制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠髖臼軟骨細胞經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
微量 RNA 定量試劑盒1mL  鮭魚精 DNA 溶液1mL

第五章 核酸擴增產品  硅膠膜離心吸附柱再生液500 次

PCR 優化試劑盒1套  硅膠膜離心吸附柱系列 ( 小提 )50 套

MgCl2溶液，25mM，PCR 級5mL  硅膠膜離心吸附柱 ( 小提 ) 收集管50 只

明膠溶液，2%，PCR 級1.5mL  硅膠膜離心吸附柱 ( 大提 ) 收集管1只
人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)elisa檢測試劑盒

人β半乳糖苷酶(βGAL)elisa檢測試劑盒免費代測

人β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)elisa檢測試劑盒

人β4整合素(ITG β4/CD104)elisa檢測試劑盒

人β2轉鐵蛋白(β2TF)elisa檢測試劑盒
大鼠髖臼軟骨細胞小鼠多配體蛋白聚糖1(SDC1)elisa檢測試劑盒

小鼠多肽YY(PYY)elisa分析檢測試劑盒

小鼠多肽YY(PYY)elisa檢測試劑盒

小鼠多萜長醇二磷酸寡糖蛋白環糊精糖基轉移酶(DDOST/OST-48)elisa分析檢測試劑盒

小鼠多萜長醇二磷酸寡糖蛋白環糊精糖基轉移酶(DDOST/OST-48)elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產品僅用于科研一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。