豬睪丸細胞懸浮適應(yīng)株；ST-2014S說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 豬睪丸細胞懸浮適應(yīng)株；ST-2014S說明書
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

5g    β- 硫代巴比妥酸    
100mL    MAL 指示劑培養(yǎng)基    
25mg    S(-) 雷氯必利 (+)- 酒石    
100 次     胎盤堿性磷酸酶檢測試劑盒    
800U    Bst DNA 聚合酶，大片段    
戊二醛磷酸緩沖固定液    131278-250    250 mL
96 孔板病毒 RNAout( 真空法 )    131191-1    1次
25mg    尿苷 -5'- 二磷酸    
1次    96 孔板病毒 RNAout( 離心法 )    
10mg    DiO( 細胞膜綠色熒光探針 )    
1g    溶壁酶干粉    
Fluo-3AM( 鈣離子熒光探針 )    22-0300-250    250μL
非凍型尿液 DNA 保存液    90315-15    15mL
50 次    葡萄球 RNAout    
500mg    崩潰酶    大鼠輸尿管上細胞*培養(yǎng)基    100mL            
氰化高鐵血紅蛋白參比液(4種×2套) /Cyanomethemoglobin reference solution        國產(chǎn)/進口    10毫升×8支    
WPMY-1(人正常前列腺基質(zhì)永生化細胞)    5×106cells/瓶×2            
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（不含瓊脂）/需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基/Thioglycollate Medium（Without Agar）    用于產(chǎn)氣莢膜梭菌確證試驗的細菌培養(yǎng)（GB、SN標準）    國產(chǎn)/進口    250克    
SDS-PAGE濃膠緩沖液(4x)    200ml        國產(chǎn)    
MDA-MB-436(人腺細胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H838(人非小細胞肺細胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
Y1(Y-1) (小鼠腎上腺質(zhì)細胞)    5×106cells/瓶×2            
LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細胞)    5×106cells/瓶×2            
HL-60(人早幼粒急性白血病細胞)    5×106cells/瓶×2            
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝細胞)    5×106cells/瓶×2            
胰腺腺    英文名稱：        Panc10.05    
麥康凱瓊脂(不含NaC1和結(jié)晶紫)/麥康克瓊脂(不含NaC1和結(jié)晶紫)/MacC    革蘭氏陰性菌的分離培養(yǎng)(抑制變形桿菌蔓延)    國產(chǎn)/進口    250克    
KATO III(人胃細胞)    5×106cells/瓶×2            
人前列腺平滑肌細胞*培養(yǎng)基    100mL            
H4-IIE(大鼠肝細胞 )    5×106cells/瓶×2        
1mg    Z-VAD-FMK(Caspase Inhibitor)    
600U    核糖核酸酶 H    
大鼠內(nèi)皮細胞分離液 1.066    120892-200    200mL
土壤 DNAout    60701-100    100 次
0.1mL×10    Rosetta(DE3)pLysS 感受態(tài)細胞    
1g    潮 B    
100 次    液相內(nèi)毒素清除劑