兔間變表皮鱗癌瘤株；VX2說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 兔間變表皮鱗癌瘤株；VX2說明書
形態(tài)特性  實(shí)體瘤
生長特性 體內(nèi)生長
特征特性  可在兔皮下、肌肉、肝臟、肺等部位移植，100%成瘤。皮下或肌肉移植100%肺轉(zhuǎn)移。 
培養(yǎng)條件   -
傳代方法  制備成細(xì)胞懸液接種至大耳白等兔。
傳代情況 不詳
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  -
同工酶 
染色體  -
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 洛塞琳    分子式：    428.43    分子量：    C20H28O10    英文名稱：    Rosarin    CAS號(hào)：    84954-93-8    
 毛異黃酮    分子式：    284.26    分子量：    C16H12O5    英文名稱：    Gross flavone    CAS號(hào)：    20575-57-9    
 黃豆黃苷     分子式：    446.4    分子量：    C22H22O10    英文名稱：    Soya bean    CAS號(hào)：    40246-10-4    
 對香豆酸    分子式：    164.15802    分子量：    C9H8O3    英文名稱：    For sweet bean acid    CAS號(hào)：    501-98-4    
 刺五加甙 E     分子式：    742.72    分子量：    C34H46O18    英文名稱：    Thorn E    CAS號(hào)：    39432-56-9    
 氯唑BH    分子式：    830.71    分子量：     C32H21N6Na3O11S3    英文名稱：    Black BH    CAS號(hào)：    2429-73-4    
 直接湖藍(lán)5B    分子式：    992.8    分子量：     C34H24N6Na4O16    英文名稱：    Direct blue 5B    CAS號(hào)：    2429-74-5    
固綠FCF    分子式：    808.91    分子量：        英文名稱：    Solid green FCF    CAS號(hào)：    2353-45-9    
 羅丹明B    分子式：    479.02    分子量：     C28H31ClN2O3    英文名稱：    Rhodamine B    CAS號(hào)：    81-88-9    
 甲基二磺酸    分子式：    176.17    分子量：     CH4O6S2    英文名稱：    Methyl two sulfonic acid    CAS號(hào)：    503-40-2    
 雙二異丙基氨基氯化磷    分子式：    266.793    分子量：     C12H28ClN2P    英文名稱：    BIS two amino acid    CAS號(hào)：    56183-63-2100 次    植物種屬鑒定 PCR Mix 7    
25g    L- 天門冬氨酸    
100g    阿拉伯樹膠粉    
100 μL    COX IV 小鼠單抗    
硼氫化氰    CAS25895-60-7    5g
一站式 - 尿素 PAGE 電泳套裝    130881-30    30 次
1臺(tái)    紫外交聯(lián)儀    
5mg    羅丹明 123    
10g    4- 甲基傘形酮    
25 T    超微量 ATP 酶測試盒 ( 可測總 ATPase)    
β- 半乳糖苷酶    CAS9031-11-2    5KU
山羊抗兔 IgG，藻紅蛋白標(biāo)記    131157-0.1    0.1mg
柱式糞便 RNAout    101109-50    50 次
25g    N-2- 羥乙基 -N’-2- 乙基磺酸    
100mg    5- 溴 -2'- 脫氧尿苷    
5mL    腎系膜細(xì)胞生長因子    
100mL    Western 印跡膜封膜液 ( 尼龍膜 )    
心肌細(xì)胞生長因子    21-0390-5    5mL
RNA  Sarkosyl( 月桂酰 -N- 甲基氨基 )     90709-100    100g
250mg    Poly(I).Poly(C)    
0.1mL×10    BL21(DE3) 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞    
1mg    MG-132(Proteasome 抑制劑 )    
20 次    一站式 GST 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝    
Nicotinamide(Sirt1 抑制劑 )    23-0510-10    10g