Cas9穩(wěn)定表達的人前列腺癌細胞；DU145-Cas9-539圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 Cas9穩(wěn)定表達的人前列腺癌細胞；DU145-Cas9-539圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞是采用慢病毒感染的方式使Du145細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法  1:4~1:6傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：x,y；CSF1PO：10,11；D12S391：18,21；D13S317：12,13；D16S539：11,11；D18S51：12,12；D19S433：13,13；D21S11：30,33,34；D2S1338：16,16；D3S1358：16,16；D5S818：10,13；D6S1043：11,11；D7S820：7,11；D8S1179：13,14；FGA：22,22；Penta E：12,14；TH01：7,7；TPOX：11,11；vWA：17,19；
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

噻孢霉素5g
DNA 電泳分子量標準 (3)λDNA/EcoR I50 次
RNA 洗脫液10mL
TH1 菌種1mL
130838-250Red-KOD DNA 聚合酶250U
70908-30DNA PAGE 膠回收試劑盒30 次
隨機引物法 DNA 探針生物素標記試劑盒5次
單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)50 次
Western 印跡膜封膜液 (NC 膜和 PVDF 膜 ) 100mL
GAPDH 小鼠單抗30μL
130634-1000人源脫嘌呤 / 脫嘧啶 (AP) 核酸內(nèi)切酶激酶1000U
130840-5MgSO4溶液，10mM，PCR 5mL
天凈沙單細胞 RNA 擴增試劑盒80 次
EDTA 溶液，0.2M1mL
無 RNase 的 DNase 溶液 ,1U/μL300U2-Chloroanthraquinone2-蒽醌131-09-9
9-(4-Acetoxy-3-acetoxymethylbutyl)-2-amino-6-chloropurine9-(4-乙酰氧基-3-乙酰氧基丁基)-2-氨基-6-嘌呤97845-60-8
5-Aminouracil5-氨基尿嘧啶932-52-5
Nalpha-FMOC-L-AsparagineFmoc-L-天冬酰胺71989-16-7
Ammonium alcohol polyvinyl phosphate聚乙醇磷酸銨
4-Nitro-3-trifluoromethyl aniline4-基-3-三基胺393-11-3
2-Fluoro-5-sulfamoyl-benzoic acid2--5-磺酰胺基-酸112887-25-9
Polygalasaponin F瓜子金皂苷己882664-74-6
Orange IV橙黃Ⅳ554-73-4
NA葡萄糖銨
CI 45010派洛B2150-48-3
2-Nitrophenylhydrazine hydrochloride2-基肼酸56413-75-3
SHANZHISIDE METHYL ESTER三梔子甙酯64421-28-9
N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methoxyaniline sodium salt dihydrateN-乙基-N-（2-羥基-3-磺丙基）-3-氧基胺82692-96-4
Acetyl bromide乙酰溴506-96-7
n-Butyllithium正丁基鋰109-72-8
Difenoconazole環(huán)唑119446-68-3
Alantolactone土木香內(nèi)酯546-43-0
Disodium fumarate富馬酸17013-01-3
Clorpyrifos毒死蜱2921-88-2
Zinc acetate醋酸鋅557-34-6
DIOSMETIN香葉木素520-34-3
顯影粉1袋
CAS7365-82-4N- 氨基甲酰甲基乙磺酸5g
131128F-100動物種屬鑒定 PCR Mix 6100 次
XbaI1500U
鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶測試盒24 T
碘硝基四唑紫嘌呤250mg