EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0910圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞；KMY0910圖片
形態(tài)特性  淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細胞系來源于一少精癥男性患者的外周血。2009年由中科院昆明細胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法  1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P4
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Y1(Y-1) (小鼠腎上腺質(zhì)細胞)5×106cells/瓶×2
LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細胞)5×106cells/瓶×2
HL-60(人早幼粒急性白血病細胞)5×106cells/瓶×2
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝細胞)5×106cells/瓶×2
胰腺腺英文名稱：Panc10.05
麥康凱瓊脂(不含NaC1和結(jié)晶紫)/麥康克瓊脂(不含NaC1和結(jié)晶紫)/MacC革蘭氏陰性菌的分離培養(yǎng)(抑制變形桿菌蔓延)250克國產(chǎn)/進口
KATO III(人胃細胞)5×106cells/瓶×2
人前列腺平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
H4-IIE(大鼠肝細胞 )5×106cells/瓶×2
小鼠脂肪細胞英文名稱：3T3 L1
BSC-1(猴腎細胞)5×106cells/瓶×2
小鼠肺大靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
Annexin V-FITC/PI雙染法細胞凋亡檢測試劑盒規(guī)格：100次
人心房肌細胞*培養(yǎng)基100mL17-trifluoromethylphenyl trinor Prostaglandin F2α （10 mg）9α，11α，15S-trihydroxy-17-trifluoromethylphenyl-18，19，20-trinor-prosta-5Z，13E-dien-1-oic acid； 17-trifluoromethylphenyl trinor PGF2α； 17-trifluoromethylphenyl trinor Prostaglandin F2α
Beraprost （sodium salt） （50 mg）2，3，3a，8b-tetrahydro-2-hydroxy-1-（3-hydroxy-4-methyl-1-octen-6-ynyl）-1H-cyclopenta[b]benzofuran-5-butanoic acid， monosodium salt； ML 1129|Procyclin|TRK 10Beraprost （sodium salt）
Leukotriene B3 （50 ug）5S，12R-dihydroxy-6Z，8E，10E-eicosatrienoic acid； LTB3； Leukotriene B3
tetranor-PGEM-d6 （100 ug）9，15-dioxo-11α-hydroxy-13，14-dihydro-2，3，4，5-tetranor-prostan-17，17，18，18，19，19-d6-1，20-dioic acid； tetranor-Prostaglandin E Metabolite-d6； tetranor-PGEM-d6
5-OxoETE-d7 （100 ug）5-oxo-6E，8Z，11Z，14Z-eicosatetraenoic-6，8，9，11，12，14，15-d7 acid； 5-KETE-d7； 5-OxoETE-d7
6-trans-12-epi Leukotriene B4 （50 ug）5S，12S-dihydroxy-6E，8E，10E，14Z-eicosatetraenoic acid； 5（S），12（S）-DiHETE|6-trans-12-epi LTB4； 6-trans-12-epi Leukotriene B4
Nitrotyrosine Affinity Sorbent （200 ug）Nitrotyrosine Affinity Sorbent
EIA Tracer Dye （1 ea）EIA Tracer Dye
Corticosterone AChE Tracer （500 dtn）Corticosterone AChE Tracer
Latanoprost AChE Tracer （500 dtn）Latanoprost AChE Tracer
HYLB肉湯/HYLB BrothBR100克國產(chǎn)/進口
人膀胱成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL
苞肉牛肉粒/Dried Meat Particle加入苞肉基礎(chǔ)中配成苞肉培養(yǎng)基100克國產(chǎn)/進口
人大隱靜脈內(nèi)細胞*培養(yǎng)基100mL