Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)株；293 001B圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)株；293 001B圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  表達(dá)Sars結(jié)構(gòu)蛋白 
培養(yǎng)條件  IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium  10%FBS；500ug/ml IL-2
傳代方法  1:6傳代；2~3天1次
傳代情況 P10
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：X；CSF1PO：11，12；D13S317：12，14；D16S539：9；D18S51：18，22；D19S433：18；D21S11：28，30.2；D2S1338：19；D3S1358：15，17；D5S818：8，9；D7S820：11，12；D8S1179：12，14；FGA：23，24；TH01：7，9.3；TPOX：11；vWA：16，19；
同工酶 
染色體  
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

生物素化的牛血清白蛋白    25mg
生物素化山羊抗親和素    0.5mg
生物素化兔 IgG    5mg
濕法電轉(zhuǎn)液 ( 干粉 )    20L
濕潤(rùn)劑 P-40    100mL
十二烷基磺酸鈉    100g
十二烷基磺酸鈉清除劑    25mL
十二烷基肌氨酸鈉    25g
十二烷基硫酸鈉    100g
十六烷基*基溴化銨    25g
石蠟包埋組織 DNAout    30 次
石蠟包埋組織 RNAout    30 次
石蠟包埋組織蛋白提取試劑盒    50 次
石蠟包埋組織全基因組擴(kuò)增試劑盒    30 次
石蠟油，PCR     10mLNaringenin （1 g）2S，3-dihydro-5，7-dihydroxy-2-（4-hydroxyphenyl）-4H-1-benzopyran-4-one； S-Dihydrogenistein|NSC 11855|NSC 34875|Salipurol； Naringenin
Magnolol （25 mg）5，5’-di-2-propen-1-yl-[1，1’-biphenyl]-2，2’-diol； NSC 293099； Magnolol
Hygromycin B （500 mg）O-6-amino-6-deoxy-L-glycero-D-galacto-heptopyranosylidene-（1→2-3）-O-β-D-talopyranosyl-（1→5）-2-deoxy-N3-methyl-D-streptamine； Hygromycin B
JWH 081 N-pentanoic acid metabolite （1 mg）5-（3-（4-methoxy-1-naphthoyl）-1H-indol-1-yl）pentanoic acid； JWH 081 N-pentanoic acid metabolite
SIRT1/2 Inhibitor IV （1 mg）2，3-dihydro-5-[（2-hydroxy-1-naphthalenyl）methyl]-6-phenyl-2-thioxo-4（1H）-pyrimidinone； Cambinol|NSC 112546|SIRT1 Inhibitor II|SIRT2 Inhibitor VI； SIRT1/2 Inhibitor IV
Pseurotin A （1 mg）（5S）-8S-benzoyl-2-[1S，2S-dihydroxy-3Z-hexen-1-yl]-9R-hydroxy-8-methoxy-3-methyl-1-oxa-7-azaspiro[4。4]non-2-ene-4，6-dione； NSC 348694； Pseurotin A
Adenosine 5’-triphosphate （sodium salt） （10 g）adenosine 5’-（tetrahydrogen triphosphate）， disodium salt； ATP|NSC 20268； Adenosine 5’-triphosphate （sodium salt）
L-AP4 （1 mg）2S-amino-4-phosphono-butanoic acid； L-（+）-2-amino-4-phosphorobutanoic acid|L-APB； L-AP4
Ro 25-6981 Maleate （1 mg）αR-（4-hydroxyphenyl）-βS-methyl-4-（phenylmethyl）-2Z-butenedioate-1-piperidinepropanol； Ro 25-6981 Maleate
Citicoline （sodium salt） （1 g）P’-[2-（trimethylammonio）ethyl] ester-cytidine 5’-（trihydrogen diphosphate）-inner， monosodium salt； Cytidine 5’-diphosphocholine|Flussorex|Gerolin|Logan|Neurotron|Sinkron； Citicoline （sodium salt）
D-Luciferin （sodium salt） （100 mg）4，5-dihydro-2-（6-hydroxy-2-benzothiazolyl）-4S-thiazolecarboxylic acid， monosodium salt； D-Luciferin （sodium salt）
CAY10677 （1 mg）5-（2-amino-5-pyrimidinyl）-N，N-diethyl-1-octyl-1H-indole-3-methanamine； Icmt Inhibitor 15； CAY10677
石榴紅硫酸鹽    1g
嗜熱菌蛋白酶    25mg
雙 (2- 羥乙基 ) 亞氨基三 ( 羥甲基 ) 甲烷    5g
雙酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)    50 次
雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（Annexin V- 熒光素 488·PI）     20 次