人淋巴細(xì)胞；1301圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人淋巴細(xì)胞；1301圖片
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性   
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法 
傳代情況 Unknown
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 B類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

F12K 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 +10% 小牛血清 )    500mL
F12K 液體培養(yǎng)基 ( 無(wú)血清和雙抗 )    500mL
Ficoll-Paque 介質(zhì)    100mL
Flemming 固定液    250 mL
Fluo-3，五銨鹽    1mg
Fluo-3AM( 鈣離子熒光探針 )    250μL
Fluorescein-12-dUTP 溶液，1mM    25μL
Fluorescein-5-maleimide    25mg
Forskolin( 腺苷酸環(huán)化酶激活劑 )    1mg
FTA 血片 DNAout    50 次
Fura-2 AM( 鈣離子熒光探針 )    1mg
Fura-2，五銨鹽    1mg
Furin 蛋白酶    50U
番紅 O    5g
反玉米素    50mg
放素 D    1mg
放素 D 溶液 ,1mg/mL    1mL
放酮    100mg
放酮溶液 ,100mg/mL    1mL
非變性蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)    25mg
非變性法蛋白沉淀試劑盒    10 次
非蛋白型 Western 封堵液    250mL2-chloro-3-Deazaadenosine （10 mg）6-chloro-1-β-D-ribofuranosyl-1H-imidazo[4，5-c]pyridin-4-amine； 2-CADO|6-Amino-2-chloropurine riboside|NSC 158902-chloro-3-Deazaadenosine
4-chloro-α-Cyanocinnamic Acid （5 mg）3-（4-chlorophenyl）-2E-cyano-2-propenoic acid； Cl-CCA； 4-chloro-α-Cyanocinnamic Acid
AM2201 N-（4-fluoropentyl） isomer （1 mg）（1-（4-fluoropentyl）-1H-indol-3-yl）（naphthalen-1-yl）methanone； AM2201 N-（4-fluoropentyl） isomer
JWH 210 7-ethylnaphthyl isomer （5 mg）（7-ethyl-1-naphthalenyl）（1-pentyl-1H-indol-3-yl）-methanone； JWH 234； JWH 210 7-ethylnaphthyl isomer
2，3-Methylenedioxymethcathinone （hydrochloride） （50 mg）1-（benzo[d][1，3]dioxol-4-yl）-2-（methylamino）propan-1-one， monohydrochloride； 2，3-MDMC； 2，3-Methylenedioxymethcathinone （hydrochloride）
5，6-dehydro Arachidonic Acid （100 ug）8Z，11Z，14Z-eicosatrien-5-ynoic acid； 5，6-dehydro AA； 5，6-dehydro Arachidonic Acid
9（Z），11（E）-Conjugated Linoleic Acid （100 mg）9Z，11E-octadecadienoic acid； 9Z，11E-CLA|Bovinic acid； 9（Z），11（E）-Conjugated Linoleic Acid
N-Oleoyl Glycine （50 mg）N-（9Z-octadecenoyl）-glycine； N-Oleoyl Glycine
5（S），6（R），15（R）-Lipoxin A4 （50 ug）5（S），6（R），15（R）-trihydroxy-7E，9E，11Z，13E-eicosatetraenoic acid； 5（S），6（R），15（R）-LXA4|AT-Lipoxin A4|15-epi Lipoxin A4； 5（S），6（R），15（R）-Lipoxin A4
Biphenylindanone A （10 mg）3’-[[（2-cyclopentyl-2，3-dihydro-6，7-dimethyl-1-oxo-1H-inden-5-yl）oxy]methyl]-[1，1’-biphenyl]-4-carboxylic acid； BINA|MRLSD 23Biphenylindanone A
Etizolam （5 mg）4-（2-chlorophenyl）-2-ethyl-9-methyl-6H-thieno[3，2-f][1，2，4]triazolo[4，3-a][1，4]diazepine； AHR 3219|Depas|Y 7131； Etizolam