AtT-20小鼠垂體瘤細胞培養方法

在成功復蘇并傳代培養Att-20細胞后，需重點關注其生長狀態和培養環境的穩定性。Att-20細胞貼壁生長，通常呈多邊形或梭形，若觀察到細胞形態異常或大量懸浮死亡，需排查培養基成分、血清質量或污染問題。

培養條件優化

1. 培養基選擇：高糖DMEM（含10%胎牛血清）是常用基礎培養基，但可嘗試添加1%非必需氨基酸（NEAA）或2mM L-谷氨酰胺以促進增殖。

2. 傳代操作：細胞密度達80%-90%時需傳代，使用0.25%胰酶（含EDTA）消化1-2分鐘，輕柔吹打避免成團。離心后按1:3至1:4比例接種至新培養瓶。

3. 凍存要點：凍存液需含10% DMSO和90%血清，程序降溫后液氮保存，避免反復凍融。

常見問題解決

- 生長緩慢：檢查血清批次活性或補充5 ng/mL bFGF（堿性成纖維細胞生長因子）。

- 聚集成團：縮短消化時間或改用低濃度胰酶（0.05%）。

- 支原體污染：定期PCR檢測，必要時使用抗生素如Plasmocin處理。

應用提示

Att-20細胞常用于激素分泌研究（如ACTH），實驗前需確保細胞狀態穩定，建議同步設置空白對照組。通過優化培養細節，可顯著提高實驗重復性與數據可靠性。