斑馬魚孕酮（PROG）ELISA試劑盒操作步驟：

①．從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

②．設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

③．樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

④．除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

⑤．棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次   （也可用洗板機洗板）。

⑥．每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

⑦．每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。