酚紅在ATCC細胞培養基中用作pH值的指示劑，一般情況下，可以通過酚紅的指示作用判斷培養基的pH值，中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色；但低血清或是無血清細胞培養基中酚紅的含量與普通細胞培養基中的酚紅含量不同，不能通過肉眼觀察或通過經驗來判定pH值，建議使用pH計進行測定。酚紅通常對含血清的細胞培養基的生物制品質量并不會產生明顯影響，也可通過純化技術去除，但酚紅在無血清細胞培養基中可能帶來胞內鈉/鉀失衡，影響細胞生長，這種作用能被血清所中和或減輕。因此，酚紅并不是細胞培養基中必需的一種成份，很多國外的疫苗或抗體企業在過程中都使用無酚紅細胞培養基。
碳酸氫鈉在ATCC細胞培養基中主要是作為緩沖系統，此外還具有調節滲透壓的作用。通常產品使用說明中的碳酸氫鈉推薦量是一個標準、安全量，是在科學的基礎上根據實踐經驗所得，但是由于不同的細胞系（株）不同，同一株細胞適應環境也可能不同（細胞耐受性不同等），且存在的地域性水質差異等，在實際過程中也可稍作改動，但使用者需做相應的檢測（理化及細胞試驗等）。
HEPES是一種非離子緩沖液，在pH 7.2 ～7.4范圍內具有較好的緩沖能力，其在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34 g /L）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10～25 mmol/L。
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
谷氨酰胺在溶液中很不穩定，4℃下放置1周可分解50%，使用中單獨配制，置-20℃冰箱中保存，使用前加入ATCC細胞培養液中。