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ATCC細(xì)胞培養(yǎng)基操作技術(shù)分析
更新時(shí)間：2017-02-07
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ATCC細(xì)胞培養(yǎng)基操作技術(shù)分析
1.準(zhǔn)備一個(gè)培養(yǎng)瓶，加入適宜細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，液體體積按照說(shuō)明書(shū)的推薦配置，并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH（CO2）。
2.在37℃水浴中或ATCC細(xì)胞的正常生長(zhǎng)溫度下將凍存管輕輕搖動(dòng)。解凍要快，約2分鐘或直到冰晶融化即可。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來(lái)消毒。進(jìn)一步的操作均需在無(wú)菌操作臺(tái)中嚴(yán)格無(wú)菌條件下進(jìn)行。
4.擰開(kāi)凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到一個(gè)含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無(wú)菌離心管中。通過(guò)溫和離心（125×g 10 min）除去冷凍保護(hù)劑（DMSO）。棄去上清，并用1或2 ml*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。將這些ATCC細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到含有*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動(dòng)以*混勻。
5.培養(yǎng)24小時(shí)后檢查細(xì)胞狀態(tài)并在需要時(shí)進(jìn)行傳代。
某些細(xì)胞系，如雜交瘤細(xì)胞，需要幾天的時(shí)間才能從凍存狀態(tài)*復(fù)蘇。某些雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)的*天活力較差，并會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞碎片。在此之后，細(xì)胞就會(huì)開(kāi)始復(fù)蘇，并進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)。
某些ATCC細(xì)胞，是在培養(yǎng)瓶中以活細(xì)胞的形式運(yùn)輸?shù)摹＿@些培養(yǎng)瓶中會(huì)接種細(xì)胞，孵育并保證細(xì)胞能生長(zhǎng)，然后補(bǔ)充滿培養(yǎng)基后再運(yùn)輸。
在收到培養(yǎng)瓶后，目視檢查培養(yǎng)基是否污染。包括異常的pH變化（苯酚紅變?yōu)辄S色或紫色），渾濁度，或有無(wú)顆粒。在低倍率（100×）的倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)基中是否有微生物污染以及ATCC細(xì)胞的形態(tài)。
